分子生物學(xué)平臺

外泌體是什么？
外泌體（exosome）是是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡，這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。從細胞中提取外泌體后可以通過(guò)透射電鏡來(lái)分析exosome的大小、形態(tài)等，再經(jīng)過(guò)Western Blot可以分析特定蛋白在exosome中的表達情況。外泌體中的蛋白、RNA和脂肪成分特異，并且攜帶了一些重要的信號分子，其在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮著(zhù)重要的作用。
 
如何提取外泌體？
外泌體的提取方法有很多，例如超速離心法、密度梯度離心、超濾離心、PEG-base沉淀法、磁珠免疫法和試劑盒提取。實(shí)驗室常用的提取方法是如下兩種：
 
1、超速離心法（差速離心）
超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行（如圖所示），可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎，但過(guò)程比較費時(shí)，且回收率不穩定（可能與轉子類(lèi)型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。
 
2、試劑盒提取
近幾年來(lái)，市場(chǎng)上已出現各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過(guò)特殊設計的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái)。這些試劑盒不需要特殊設備，隨著(zhù)產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代，提取效率和純化效果逐漸提高，因而逐漸取代超速離心法并推廣開(kāi)來(lái)。有些試劑盒操作簡(jiǎn)便，不用超速離心，同時(shí)可獲得高純度和高回收率的外泌體。
 
 
外泌體粒徑分析、濃度檢測
外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle tracking Analysis, NT A)，其原理是對每個(gè)顆粒的布朗運動(dòng)進(jìn)行追蹤和分析，結合 Stockes-Einstein 方程式計算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式，NT A技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。

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