江蘇省南京市棲霞區和燕路371號 東南大學(xué)國家大學(xué)科技園科創(chuàng )樓A301
小鼠關(guān)節炎造模SOP
一、實(shí)驗材料
牛二型膠原(北京博蕾德技術(shù)發(fā)展有限公司,20022)
CFA (北京博蕾德技術(shù)發(fā)展有限公司,7008)
二、實(shí)驗方法
1、將牛二型膠原溶于0.05M醋酸中,終濃度2-4mg/ml,溫和攪拌,4℃過(guò)夜。
2、將牛二型膠原醋酸溶液與CFA等量混合并乳化,乳化使用高速攪拌器,冰浴攪拌CFA和膠原溶液,一般攪拌3次,30000rpm/3min。保證乳化液滴入水中成團不散開(kāi)。
3、初次免疫:小鼠尾根注射0.1ml乳液。從尾根部2cm處插入針頭,針尖距離尾根0.5cm注射。
4、二次免疫:第21天,小鼠尾根再次注射0.1ml乳液。從尾根部2cm處插入針頭,針尖距離尾根0.5cm注射。
5、一般在二次免疫后7-12天,模型組小鼠80%以上會(huì )出現關(guān)節炎癥狀。根據小鼠關(guān)節紅腫程度和活動(dòng)狀態(tài)進(jìn)行臨床評分。在實(shí)驗前和實(shí)驗后的第3、5、7、12天分別觀(guān)察記錄。
評分標準:
得分 | 發(fā)病情況 |
0 | 正常 |
1 | 腳部皮膚發(fā)紅,無(wú)明顯腫脹 |
2 | 輕度的踝關(guān)節、腕關(guān)節發(fā)紅、腫脹 |
3 | 踝關(guān)節或腕關(guān)節中度發(fā)紅腫脹 |
4 | 腳趾及關(guān)節紅腫嚴重,強直或畸形 |
三、實(shí)驗結果