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掃描電鏡



掃描電鏡案例
 

 掃描電鏡是介于透射電鏡和光學(xué)顯微鏡之間的一種微觀(guān)形貌觀(guān)察手段，利用極狹窄的電子束去掃描樣品，通過(guò)電子束與樣品的相互作用產(chǎn)生各種效應從而微觀(guān)成像，其成像富有立體感，利用掃描電鏡我們可直接觀(guān)察各種樣品表面的細微結構。

  掃描電鏡在生物醫學(xué)領(lǐng)域有廣泛的應用，主要應用于細胞或組織樣本表面超微結構的觀(guān)察分析，例如細胞表面結構，氣管，腸道，皮膚、納米藥物、生物醫學(xué)材料、細菌、真菌等。
  
實(shí)驗流程：
1. 樣品的初步處理
a. 取材樣品面積可達8mm×8mm，厚度可達5mm。對于易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等，可固定在濾紙或卡片紙上，以充分暴露待觀(guān)察的組織表面。
b. 樣品的清洗
(1)用等滲的生理鹽水或緩沖液清洗；
(2)用5%的蘇打水清洗；
(3)用超聲震蕩或酶消化的方法進(jìn)行處理。
c. 固定：固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同，常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大，固定時(shí)間應適當延長(cháng)。也可用快速冷凍固定。
d. 脫水：樣品經(jīng)漂洗后用逐級增高濃度的酒精或丙酮脫水，然后進(jìn)入中間液，一般用醋酸異戊酯作中間液。
2. 樣品的干燥
a. 空氣干燥法
空氣干燥法又稱(chēng)自然干燥法，就是將經(jīng)過(guò)脫水的樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸
揮發(fā)干燥。這種方法的最大優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便易行和節省時(shí)間；它的主要缺點(diǎn)是在干燥過(guò)程中，組
織會(huì )由于脫水劑揮發(fā)時(shí)表面張力的作用而產(chǎn)生收縮變形。因此，該方法一般只適用于表面較
為堅硬的樣品。
b. 冷凍干燥法
(1)置于冷凍保護劑中：將樣品置于冷凍保護劑中浸泡數小時(shí)。常用的冷凍保護劑為10%～20%二甲基亞砜水溶液，或15%-40%甘油水溶液。
(2)驟冷：將經(jīng)過(guò)保護劑處理的樣品迅速投入用液氮預冷至(150℃的氟利昂冷凍劑中，使樣品中的水分很快凍結。
(3)干燥：將已凍結的樣品移到冷凍干燥器內已預冷的樣品臺上，抽真空，經(jīng)幾小時(shí)或數天后，樣品即達到干燥。本方法不需要脫水，避免了有機溶劑對樣品成分的抽提作用，不會(huì )使樣品收縮，也是較早使用的方法。但是，由于花費時(shí)間長(cháng)，消耗液氮多，容易產(chǎn)生冰晶損傷，因此未被廣泛應用。
3. 樣品的導電處理(真空鍍膜法)
真空鍍膜法是利用真空膜儀進(jìn)行的。其原理是在高真空狀態(tài)下把所要噴鍍的金屬加熱，當加熱到熔點(diǎn)以上時(shí)，會(huì )蒸發(fā)成極細小的顆粒噴射到樣品上，在樣品表面形成一層金屬膜，使樣品導電。噴鍍用的金屬材料應選擇熔點(diǎn)低、化學(xué)性能穩定、在高溫下和鎢不起作用以及有高的二次電子產(chǎn)生率、膜本身沒(méi)有結構?，F在一般選用金或金和碳。為了獲得細的顆粒，有用鉑或用金-鈀、鉑-鈀合金的。金屬膜的厚度一般為10 nm～20 nm。真空鍍膜法所形成的膜，金屬顆粒較粗，膜不夠均勻，操作較復雜并且費時(shí)，目前已經(jīng)較少使用。
4. 拍攝。

服務(wù)說(shuō)明及結果：
1. 客戶(hù)提供：
8-10 mm3 左右的組織塊，取材部位要求盡量精準。
如為細胞，細胞數需≥10^6。
2. 公司提供：基本實(shí)驗步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析。
3. 實(shí)驗周期：25-30個(gè)工作日。
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