動(dòng)物模型構建平臺

胃潰瘍造模小鼠

1．實(shí)驗動(dòng)物
雄性清潔級昆明種小鼠152只，體重24.35±1.06g，購自中科院上海實(shí)驗動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK(滬)2003-0003。

2．主要儀器
ACS-6A型計價(jià)電子秤，數字WMY-01型溫度計，SQF-EA體視顯微鏡，3200K(色溫)、250W攝像專(zhuān)用光源及自制光源裝置，NIKONCoolpix 4500數碼相機，底部劃有5.0cm×4.0cm方格的實(shí)驗籠用于曠場(chǎng)檢測，DK-S22型恒溫水浴箱，小鼠固定器。

3．藥物與試劑
1)磷酸組織胺，5g/瓶，國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)(批號：62014032)，用時(shí)配制成8mg/ml水溶液。
2)消炎痛，25mg/片，中美合資上海辛帕斯制藥有限公司生產(chǎn)(批號：060201)，用時(shí)溶于5％NaHCO3溶液，濃度為5mg/ml。
3)利血平注射液，1mg/支，上海醫科大學(xué)紅旗制藥廠(chǎng)生產(chǎn)(批號：050302)。
4)無(wú)水乙醇，500ml/瓶，國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)(批號： KJ20060509)。
5)冰醋酸，500ml/瓶，國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)(批號：T2006430)。
6)0.9％生理鹽水，500ml/瓶，上海華源長(cháng)富藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號：06110202)。
7)碳酸氫鈉，500g/瓶，上海實(shí)驗試劑有限公司生產(chǎn)(批號：051102)。
8)乙醚，500ml/瓶，國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)(批號：CY050104)。
9)注射用青霉素鈉，0.5g/80萬(wàn)U，上海新先鋒藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號：060902)。

4．造模方法
152只小鼠，隨機分為9組，即空白對照組(正常對照組)、禁食對照組、水浸拘束法組、乙酸法組、假手術(shù)對照組、磷酸組織胺組、消炎痛組、利血平組、乙醇法組。其中乙酸法組、假手術(shù)對照組因需要手術(shù)每組為20只(以免術(shù)后意外死亡使這些組別的樣本減少)，其余各組為16只。以造模前一天為第0日，造模當天為第1日。除正常對照組外，其余8組于第0日上午7：00同時(shí)開(kāi)始禁食不禁水至第1日上午7：00，達24h。第1日早晨7：00開(kāi)始，各組按時(shí)間安排依次開(kāi)始造模，至晚19：00全部造模結束，期間各組造模前仍禁食不禁水。具體如下：
1)空白(正常)對照組：正常飲水、攝食。
2)禁食對照組：正常飲水，繼續禁食至晚19：00。
3)水浸拘束組：早晨7：00開(kāi)始，將各小鼠置于小鼠固定器中，限制活動(dòng)，頭朝上立于23℃左右的恒溫水浴內，水面齊劍突，至晚19：00。
4)乙酸組：早晨8：00，乙醚吸入麻醉小鼠，無(wú)菌手術(shù)開(kāi)腹，暴露胃，在胃前壁漿膜面竇體交接處同一部位(避開(kāi)血管)，用浸有冰醋酸，邊長(cháng)為5mm的正方形濾紙接觸2次，每次30秒，然后還納胃體，逐層縫合切口。
5)假手術(shù)對照組：方法同乙酸法組，濾紙浸生理鹽水。乙酸及假手術(shù)組交替進(jìn)行，早11：00前手術(shù)結束。
6)磷酸組織胺組：上午11：00，灌胃8mg/ml磷酸組胺溶液0.8mg/10g。
7)消炎痛組：下午13：00，皮下注射5mg/ml消炎痛NaHCO3溶液0.3mg/10g。
8)利血平組：下午13：00，皮下注射1mg/ml利血平注射液0.1mg/10g。
9)乙醇組：下午18：00，灌胃無(wú)水乙醇0.1ml/10g。
晚19：00造模結束后，所有組別動(dòng)物各隨機一分為二，一半處死，另一半恢復正常飲水攝食，清潔級條件下常規飼養，觀(guān)察其自然恢復及四診表現，至第8日全部處死。其中乙酸及假手術(shù)組對存活的一半動(dòng)物，后肢肌注青霉素鈉40萬(wàn)U/kg，連續3d。

5．指標檢測
(1)四診指標檢測
檢測體重、攝食量、飲水量、曠場(chǎng)水平跨格(跨格數)和垂直站立(前肢離地站立數)、腋溫、爪、尾、舌顯微拍照及圖像處理，檢測自然狀態(tài)下心電圖，以及一般情況觀(guān)察如動(dòng)物恢復及死亡情況等。第0日、2日、5日、8日各檢測1次，共4次。
(2)胃整體稱(chēng)重
從幽門(mén)和賁門(mén)部截取造模第1日、8日整個(gè)胃，入bouin液固定約12h左右，用雙面刀片沿胃大彎剖一開(kāi)口，用滴管取bouin液沖洗胃內壁，繼續固定。固定至24h后，先入70％乙醇24h，再入50％乙醇24h，最后入30％乙醇24h后取出稱(chēng)重。
(3)胃前內壁黏膜肉眼觀(guān)察
上法胃整體稱(chēng)重后，分離前后壁，觀(guān)察前壁內側面。
(4)病理組織學(xué)
取近胃竇近幽門(mén)胃體前壁0.5×1.0cm組織條制作病理切片，兼顧病變及與其交界正常胃壁，常規HE染色，光鏡下觀(guān)察。