細胞生物學(xué)平臺

脂肪干細胞分離培養
 

大鼠脂肪干細胞的分離
  將手術(shù)切取的大鼠脂肪組織盡量剪碎后移至離心管，其余步驟與人脂肪干細胞的分離一致。
  經(jīng)手術(shù)切除獲得的大鼠皮下脂肪組織消化后原代培養24 h，肉眼觀(guān)察會(huì )發(fā)現培養瓶底部貼附著(zhù)一層網(wǎng)狀薄膜，輕輕搖晃培養瓶可使這層網(wǎng)狀薄膜從瓶壁上脫落，鏡下觀(guān) 察發(fā)現大部分細胞都附著(zhù)于這層膜上，通過(guò)吸脂術(shù)獲取的人脂肪組織消化后則無(wú)此現象。增加膠原酶的量和消化時(shí)間也無(wú)法避免，取材時(shí)的毛細血管或脂肪間結締組織未被完全消化，穿過(guò)細胞篩進(jìn)入了培養瓶并沉淀于瓶底部形成的。膠原蛋白酶雖然可以特異性水解膠原蛋白的三維螺旋結構，但不會(huì )損傷其他蛋白質(zhì)。處理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 消化5 min。然后利用40μm的細胞篩過(guò)濾后傳代。 根據作者的經(jīng)驗，每毫升手術(shù)切除的大鼠脂肪可分離基質(zhì)血管成分細胞約1.81*10⁶個(gè)。原代培養2.24*10⁷個(gè)大鼠基質(zhì)血管成分細胞，40 h后傳代時(shí)約剩余 6.2×10^6個(gè)細胞，細胞剩余率27%。

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