細胞轉染實(shí)驗

一、實(shí)驗目的

學(xué)習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法——脂質(zhì)體介導的轉染。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀(guān)測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實(shí)驗材料。

二、實(shí)驗原理

上圖所示是脂質(zhì)體介導轉染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細胞的一般過(guò)程。

外源基因進(jìn)入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過(guò)直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進(jìn)入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實(shí)驗條件控制較嚴、難度較大；病毒法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響；所以現在對于很多普通細胞系，一般的瞬時(shí)轉染方法多采用脂質(zhì)體法。

利用脂質(zhì)體轉染法最重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例，細胞密度以及轉染的時(shí)間長(cháng)短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問(wèn)題，通過(guò)實(shí)驗摸索的合適轉染條件對于效率的提高有巨大的作用。

上圖是本次實(shí)驗采用的脂質(zhì)體中陽(yáng)離子組分的結構的示意圖。

本次實(shí)驗采用的脂質(zhì)體是promega公司的TransFast脂質(zhì)體試劑，它是一種陽(yáng)離子脂質(zhì)體和中性脂質(zhì)體的混合物，是對于本次實(shí)驗中采用的293T細胞優(yōu)化的轉染試劑。

三、實(shí)驗材料與器材

1、材料

293T細胞

MyoD表達質(zhì)粒和EGFP表達質(zhì)粒

DMEM培養基

鏈霉素/青霉素（雙抗）

FCS（小牛血清）

PBS（磷酸鹽緩沖溶液）

胰酶/EDTA消化液

轉染試劑（TransFast