江蘇省南京市棲霞區和燕路371號 東南大學(xué)國家大學(xué)科技園科創(chuàng )樓A301
agomir是一種用于微RNA功能研究的化學(xué)修飾的雙鏈微RNA模擬物,它可以模仿內源性的成熟微RNA,與靶基因mRNA結合,從而調節其表達。agomir與普通的微RNA模擬物相比,具有更高的穩定性和活性,更易通過(guò)細胞膜和組織間隙,富集于靶細胞。因此,agomir可以用于體內實(shí)驗,通過(guò)注射、吸入或喂食等方式給予動(dòng)物,觀(guān)察微RNA對生理和病理過(guò)程的影響。
agomir的合成需要對微RNA模擬物進(jìn)行特殊的化學(xué)修飾,包括在反義鏈上加入2個(gè)硫代磷酸酯鍵(phosphorothioate)在5′端,4個(gè)硫代磷酸酯鍵在3′端,以及3′端加入膽固醇(cholesterol)基團,同時(shí)對全長(cháng)核苷酸進(jìn)行2′-甲氧基(2′-methoxy)修飾。這些修飾可以提高agomir的穩定性,防止被核酸酶降解,增強其與細胞膜的親和力,促進(jìn)其進(jìn)入細胞。
agomir的使用需要注意以下幾點(diǎn):
? agomir的設計需要參考miRBase數據庫中的微RNA序列,選擇合適的靶基因和靶組織。
? agomir的劑量和給藥方式需要根據實(shí)驗目的和動(dòng)物模型進(jìn)行優(yōu)化,一般建議從低劑量開(kāi)始逐步增加,觀(guān)察效果和副作用。
? agomir的效果持續時(shí)間一般為1周以上,甚至可達5-6周,因此需要合理安排實(shí)驗時(shí)間點(diǎn)和取樣方式。
? agomir的使用需要配合相應的負對照(negative control),即沒(méi)有靶基因結合位點(diǎn)的隨機序列修飾物,以排除非特異性效應。
? agomir的使用需要結合其他方法進(jìn)行驗證,如RT-qPCR、Western blot、免疫組化等,以評估微RNA和靶基因表達水平的變化。