常見(jiàn)問(wèn)題解答

1.大鼠的保定

1)徒手保定

右手抓住大鼠尾根部將其輕輕提起，置于籠罩或實(shí)驗臺面上，以左手掌心輕輕扣住大鼠背部，左手拇指與其余四指相對，由耳后抓住大鼠頸背部皮膚，反轉手腕使大鼠腹面向上。對較小個(gè)體的大鼠也可將拇指和食指插入大鼠腋下環(huán)繞，使大鼠頭部和肩部置于手掌虎口中，其余三指和掌心握住大鼠身體，反轉手腕使大鼠腹面向上。

2)器械固定

根據實(shí)驗需要可選用器械固定，可用燒杯罩住大鼠身體，將尾部露出，進(jìn)行尾部操作，或使用大鼠固定器固定。大鼠固定器通常為圓筒形結構，大鼠可自動(dòng)鉆入放在面前的筒狀固定器中，通過(guò)調節固定器的長(cháng)短來(lái)限制鉆進(jìn)筒中大鼠的活動(dòng)，主要用于尾部操作。

3)解剖板固定

麻醉后的大鼠可固定于專(zhuān)用解剖板上，按實(shí)驗所需體位，用紗布條或細棉繩綁定四肢，另外一頭可以固定于板周邊緣上，必要時(shí)可令大鼠腹面向上，用皮筋扣住門(mén)齒，以固定頭部。

4)注意事項

大鼠切齒較長(cháng)，抓取不當、刺痛或激怒狀況下可能咬傷實(shí)驗者，應注意個(gè)人防護。抓住尾部提取大鼠時(shí)，如果抓住靠尾端部，若大鼠掙扎激烈可導致鼠尾皮膚撕脫。徒手抓取大鼠時(shí)，如果握力太大可使大鼠窒息死亡，應在操作時(shí)不斷有意識地調整和放松力量。

2.供試品給予方法

1)經(jīng)口途徑

(1)口服法：把藥物放入飼料或溶于飲水中讓大鼠自動(dòng)攝取。此法優(yōu)點(diǎn)在于簡(jiǎn)單方便，缺點(diǎn)是不能保證劑量準確。適用于對動(dòng)物疾病的防治或某些藥物的毒性實(shí)驗，以及復制某些與食物有關(guān)的人類(lèi)疾病動(dòng)物模型。

(2)灌胃法：在急性實(shí)驗中，宜采用灌胃法。灌胃法是用灌胃器將所應投給動(dòng)物的藥灌到動(dòng)物胃內。灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構成，大鼠的灌胃針長(cháng)6～8cm，直徑約1.2mm。灌胃針的尖端焊有一小金屬圓球，金屬球是中空的。焊金屬球的目的是防止針頭刺入氣管或損傷消化道。針頭金屬球端可彎曲成20°左右的角度，以適應口腔、食道的生理彎曲度走向。用左手固定大鼠，右手持灌胃器，將灌胃針從大鼠的口腔插入，壓迫其頭部，使口腔與食道成一直線(xiàn)，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食道，可感到輕微的阻力，此時(shí)可略微變換灌胃針?lè )较?，以刺激引起吞咽?dòng)作，順勢推進(jìn)直至所需深度，推出少許藥液并觀(guān)察動(dòng)物反應，如動(dòng)物表現安靜、呼吸正常，可緩慢推入余下藥液，然后輕輕退出針頭。一般灌胃針插入大鼠食道為4～6cm。大鼠灌胃量一般是1ml/100g，常用灌胃量一般每次可為1～4ml。

2)經(jīng)皮膚途徑

大鼠是常用的經(jīng)皮給藥模型，尤其是用于經(jīng)皮毒性試驗。首先對大鼠背部一定面積的皮膚脫毛，以前用脫毛劑，現在常用不損傷皮膚的直流電電動(dòng)剃刀。大鼠脫毛后用專(zhuān)用的固定架固定，將藥液涂在皮膚上，用透氣材料覆蓋并以無(wú)刺激膠布固定一定時(shí)間(如4h)，將大鼠從固定架取出，去除膠布和覆蓋物，用溫水清洗，吸干身上的水珠。使用揮發(fā)性的藥液必須在通風(fēng)櫥內進(jìn)行。

3)注射途徑

皮下注射：一般選取背部皮下及后肢皮下。注射時(shí)用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚，右手持注射器將針頭刺入，把針尖輕輕向左右擺動(dòng)，容易擺動(dòng)則表明已刺入皮下，然后注射藥物。給藥容量為0.1～0.3ml/10g體重。

(1)皮內注射：參見(jiàn)小鼠的方法(第十章)執行。

(2)肌內注射：肌內注射一般選用肌肉發(fā)達、無(wú)大血管經(jīng)過(guò)的部位。注射時(shí)針頭要垂直快速刺入肌肉，如無(wú)回血現象即可注射。注射部位宜選大腿外側肌群。

(3)靜脈注射：大鼠的靜脈注射常采用尾靜脈注射。參見(jiàn)小鼠的方法(第十章)。一次的注射量為0.1～0.2ml/10g體重。

(4)腹腔注射：參見(jiàn)小鼠的方法(第十章)執行。

4)其他途徑給藥方法

(1)呼吸道給藥：呈粉塵、氣體及蒸汽或霧等狀態(tài)的藥物或毒氣，可通過(guò)動(dòng)物呼吸道給藥。如實(shí)驗時(shí)給動(dòng)物做乙醚吸入麻醉、用鋸末煙霧制作慢性氣管炎動(dòng)物模型等，特別在毒理學(xué)實(shí)驗中應用較廣泛。

(2)腦內給藥：常用于微生物學(xué)動(dòng)物實(shí)驗，將病原體等接種于被檢動(dòng)物腦內，然后觀(guān)察接種后的各種變化。用手掌壓住大鼠身體，并固定頭部，在前額正中的眼耳連線(xiàn)中點(diǎn)，垂直進(jìn)針，刺入2～3mm，一次注射的參考量為0.03～0.05ml。

(3)直腸內給藥：使用頂端光滑膨大的針頭(或灌胃針)，用手指按摩法排出大鼠直腸內的糞便，徒手固定大鼠，使大鼠保持頭低尾高，妥善固定其尾部后，將針頭慢慢插入大鼠肛門(mén)，并順直腸方向推進(jìn)，達到所需深度后推進(jìn)藥液，同時(shí)使針頭緩慢退出至藥液完全注入。

3.樣品收集

1)血液采集

(1)尾靜脈采血：需血量較少時(shí)，如作紅、白細胞計數，血紅蛋白測定，制作血涂片等可用此法。動(dòng)物麻醉后，用75％乙醇消毒尾部皮膚，用刀割破尾動(dòng)脈或尾靜脈，讓血液自行流出。采血結束后，消毒、止血。多次反復采血應從尾尖部開(kāi)始。

(2)眼眶后靜脈叢采血：采用一根特制的長(cháng)7～10cm的硬質(zhì)玻璃取血管，其一端內徑為1～1.5mm，另一端逐漸擴大，細端長(cháng)約1cm即可。將取血管浸入1％肝素溶液，干燥后使用。采血時(shí)，左手拇指及食指抓住鼠兩耳之間的皮膚使鼠固定，并輕輕壓迫頸部?jì)蓚?，阻礙靜脈回流，使眼球充分外突，眼眶后靜脈叢充血。右手持取血管，將其尖端插入內眼角與眼球之間，輕輕向眼底方向刺入，刺入4～5mm深，當感到有阻力時(shí)即停止刺入，旋轉取血管以切開(kāi)靜脈叢，血液即流入取血管中。采血結束后，拔出取血管，放松左手，無(wú)菌紗布按壓止血。用本方法大鼠一次可采血0.5～1.0ml。

(3)股靜脈或股動(dòng)脈采血：大鼠多采用股靜脈或股動(dòng)脈采血，方法是：大鼠經(jīng)麻醉后，剪開(kāi)腹股溝處皮膚，即可看到股靜脈，把此靜脈剪斷或用注射器采血即可，股動(dòng)脈較深需先剝離，再采血。

(4)腹主動(dòng)脈采血：大鼠麻醉后，仰臥于實(shí)驗臺上，剖開(kāi)腹腔，移開(kāi)腹部臟器，暴露位于后腹壁的腹主動(dòng)脈，以注射器向心方向刺入抽取血液。此法常用于實(shí)驗結束時(shí)，采血量較大。

2)尿液及糞便采集

(1)代謝籠法：將大鼠放在特制的代謝籠內，動(dòng)物排便時(shí)，可以通過(guò)籠子底部的大小便分離漏斗將尿液與糞便分開(kāi)，達到采集的目的。由于大鼠尿量較少，操作中的損失和蒸發(fā)，大鼠膀胱排空不一致等，都可造成誤差，因此一般需收集5h以上的尿液，最后取平均值。如需要測定尿中活性成分，尿液收集瓶應置于冰袋中，或采用可以制冷的代謝籠。

(2)反射排尿法：大鼠被人抓住尾巴提起時(shí)排便反射比較明顯。故若需采取少量尿液時(shí)，可提起大鼠，將排出的尿液接到帶刻度的容器內。用手指輕輕按摩大鼠直腸兩側，也可刺激大鼠反射性排出糞便。

3)精液采集

(1)電刺激采精法：主要器材為大鼠固定板、電極、電源。將雄性大鼠呈站位或臥位保定，剪去包皮周?chē)谋幻?，并用生理鹽水沖洗、拭干，將電極插入直腸直至到靠近輸精管壺腹部的直腸底壁(深度2～3cm)。選擇電極電源的頻率、電壓和電流至大鼠勃起射精，收集精液(電刺激參數：頻率20～30Hz，電壓3～12V，電流4～12mA，1～3s/次，間隔時(shí)間2～5s)。

(2)附睪內采精法：參見(jiàn)小鼠的方法(第十章)執行。

(3)陰道栓涂片法：參見(jiàn)小鼠的方法(第十章)執行。

4.麻醉與鎮痛

1)吸入麻醉法

麻醉藥以蒸汽或氣體狀態(tài)經(jīng)呼吸道吸入而產(chǎn)生麻醉，常用乙醚作為麻醉藥。使用乙醚麻醉大鼠時(shí)，可將動(dòng)物放入有機玻璃麻醉箱內，把裝有浸潤乙醚棉球的小燒杯放入麻醉箱，然后觀(guān)察動(dòng)物。開(kāi)始動(dòng)物自主活動(dòng)，不久動(dòng)物出現異常興奮，不停地掙扎，隨后排出大、小便，漸漸由興奮轉為抑制，倒下不動(dòng)，呼吸變慢。如動(dòng)物四肢緊張度明顯減低、角膜反射遲鈍、皮膚痛覺(jué)消失，則表示動(dòng)物已進(jìn)入麻醉，可行手術(shù)和其他操作。乙醚易燃，應避免引火，并應在通風(fēng)櫥中進(jìn)行麻醉。

2)注射麻醉法

常用的麻醉藥有戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙酯等。大鼠常采用腹腔注射法進(jìn)行全身麻醉。封閉群大鼠對麻醉藥的反應個(gè)體差異較大，在注射麻醉藥物時(shí)，先用麻醉藥總量的2/3，密切觀(guān)察動(dòng)物生命體征的變化，如已達到所需麻醉的程度，余下的麻醉藥則不用，避免麻醉過(guò)深抑制延腦呼吸中樞，導致動(dòng)物死亡。

大鼠腹腔注射全身麻醉常用藥物及用量如下。戊巴比妥鈉：3％～5％生理鹽水溶液，腹腔注射40～50mg/kg體重。硫噴妥鈉：1％～3％水溶液，腹腔注射40mg/kg體重。氨基甲酸乙酯(烏拉坦)：20％～25％水溶液，腹腔注射1000～2000mg/kg體重。氯胺酮：腹腔注射75～90mg/kg體重。

3)局部麻醉

用局部麻醉藥阻滯周?chē)窠?jīng)末梢或神經(jīng)干、神經(jīng)節、神經(jīng)叢的沖動(dòng)傳導，起到局部性麻醉與鎮痛作用。局部麻醉操作方法很多，可分為表面麻醉、局部浸潤麻醉、區域阻滯麻醉及神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉。

(1)表面麻醉：利用局部麻醉藥的組織穿透作用，透過(guò)黏膜，阻滯表面的神經(jīng)末梢。在口腔及鼻腔黏膜、眼結膜、尿道等部位手術(shù)時(shí)，可把麻醉藥涂敷、滴入、噴于表面上，或尿道灌注給藥。藥物宜選用0.5％～1％利多卡因。

(2)區域阻滯麻醉：在手術(shù)區四周和底部多點(diǎn)注射麻醉藥阻斷疼痛的向心傳導。常用藥為0.5％～1％普魯卡因。

(3)神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉：在神經(jīng)干(叢)的周?chē)⑸渎樽硭?，阻滯其傳導，使其所支配的區域無(wú)疼痛。常用藥為0.5％～1％利多卡因。

(4)局部浸潤麻醉：沿手術(shù)切口逐層注射麻醉藥，靠藥液的張力彌散浸入組織，麻醉感覺(jué)神經(jīng)末梢。常用藥為0.25％～0.5％利多卡因、0.5％～1％普魯卡因。

5.安死術(shù)

1)頸椎脫臼法

將大鼠置于粗糙平面上，左手拇指與食指用力向下按住鼠頭的同時(shí)，右手抓住鼠尾用力向后拉，將脊髓與腦髓拉斷，大鼠立即死亡。此法適用于體重200g以下的大鼠。

2)急性失血法

大鼠麻醉后，可采用股動(dòng)脈放血方法使大鼠急性失血死亡。

3)過(guò)量麻醉法

注射過(guò)量麻醉藥物，以常用麻醉劑量的10～20倍注射造成動(dòng)物死亡。也可以吸入過(guò)量的乙醚、異氟烷、異氟醚、甲氧氟烷等麻醉藥使動(dòng)物致死。

4)CO2致死法

將大鼠放入專(zhuān)用的容器或塑料袋內，打開(kāi)CO2儲氣罐，通過(guò)氣體輸送管，將CO2輸入容器內，大鼠吸入CO2后逐漸昏睡，直至死亡。CO2價(jià)廉、不易燃、不易爆、不對環(huán)境產(chǎn)生污染，當裝置選用合理時(shí)，對操作人員也沒(méi)有任何危害?，F在有商品化的CO2動(dòng)物處死設備。