ELISA 組織樣本處理方法
關(guān)鍵詞：分子生物學(xué) 實(shí)驗室 elisa 酶聯(lián)免疫吸附試驗 酶聯(lián)免疫檢測 分子檢測 第三方檢測機構
小鼠心臟組織處理方法
● 提取緩沖液：100 mM PIPES (pH?7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF 和蛋白酶抑制劑混合物（Sigma-Aldrich）
● 步驟：取左心室組織，在異 - 戊 - 烷中冷凍。將 ~10?mg 左心室組織于 2–3 ml 提取緩沖液中勻漿，然后在 4℃下 16000g 離心 30 分鐘。上清用于 ELISA 法測定 BDNF 蛋白水平。單位 pg /mg 總蛋白。
● 參考文獻：Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). "Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion." EBioMedicine 47: 384-401.
小鼠肝組織處理方法
● 提取緩沖液：RIPA 緩沖液（50 mM Tris–HCl，150 mM 氯化鈉，1 mM EDTA，1%NP-40，1% 脫氧膽酸鈉，0.1% 十二烷基硫酸鈉），加蛋白酶抑制劑混合物（100×；Cell Signaling Technology，USA）
● 步驟：肝組織（50 mg）在提取緩沖液中勻漿。離心取上清，采用 ELISA 法檢測了 IL‐25, IL‐33, IL‐1β, MMP2, MMP9, 及 TIMP1 的含量。
● 參考文獻：Loh, Z., R. L. Fitzsimmons, R. C. Reid, D. Ramnath, A. Clouston, P. K. Gupta, K. M. Irvine, E. E. Powell, K. Schroder, J. L. Stow, M. J. Sweet, D. P. Fairlie and A. Iyer (2019). "Inhibitors of class I histone deacetylases attenuate thioacetamide-induced liver fibrosis in mice by suppressing hepatic type 2 inflammation." Br J Pharmacol 176(19): 3775-3790.
小鼠脾臟腫瘤的制備方法
● 提取緩沖液：50 mM 磷酸鉀，pH 7.1，0.1 M NaCl，2 mM EDTA，0.4 mM phenylmethylsulfonyl fluoride，60 μg/mL soybean trypsin inhibitor，2 μg/mL leupeptin，2 μg/mL aprotinin，2 μg/mL pepstatine
● 步驟：切除脾臟腫瘤組織，立即在液氮中冷凍并在 -70 °C 下儲存。冷凍組織在冰浴預冷提取緩沖液中化凍。冰浴，撕裂組織。然后 4℃下，超聲處理。4℃下以 100000 × g 離心 15 分鐘去除碎片，所得上清再次在 4℃下以 100000 × g 離心 30 分鐘。上清液含有胞漿蛋白，顆粒包含膜部分。
● 參考文獻：Yao, M., S, Kargman, E.C. Lam, C.R. Kelly, Y.X. Zheng, P. Luk, E. Kwong, J.F. Evans and M.M. Wolfe (2003) Inhibition of cyclooxygenase-2 by rofecoxib attenuates the growth and metastatic potential of colorectal carcinoma in mice. Cancer Research 63(3):586-592.
小鼠肺組織處理方法
● 提取緩沖液：1× 磷酸鹽緩沖液（PBS）
● 步驟：左肺在 1× 磷酸鹽緩沖鹽水中機械破壞，經(jīng)過(guò) 4 次冷凍 / 解凍循環(huán)以打破細胞膜，然后 4℃下，5000g，離心 5 分鐘，回收上清用于 ELISA 法測定 Ang II 濃度。
● 參考文獻：Gonzalez-Tajuelo, R., M. de la Fuente-Fernandez, D. Morales-Cano, A. Munoz-Callejas, E. Gonzalez-Sanchez, J. Silvan, J. M. Serrador, S. Cadenas, B. Barreira, M. Espartero-Santos, C. Gamallo, E. F. Vicente-Rabaneda, S. Castaneda, F. Perez-Vizcaino, A. Cogolludo, L. J. Jimenez-Borreguero and A. Urzainqui (2020). "Spontaneous Pulmonary Hypertension Associated With Systemic Sclerosis in P-Selectin Glycoprotein Ligand 1-Deficient Mice." Arthritis Rheumatol 72(3): 477-487.
小鼠腎臟組織處理方法
● 提取緩沖液：0.1 M Tris-HCl （pH 7.4）
● 步驟：將 0.5 g 腎組織與 5 ml 提取緩沖液混合。用機械攪拌器攪拌均質(zhì)。勻漿離心 15 分鐘（5000g）兩次。取上清用 ELISA 法測 TNF-α 和 IL-1β 濃度。
● 參考文獻： Jaremek, M., Nieradko-Iwanicka, B (2020). " The effect of subacute poisoning with fenpropathrin on mice kidney function and the level of interleukin 1 beta and tumor necrosis factor alpha" MOLECULAR BIOLOGY REPORTS 47(6):4861-4865.
小鼠腦組織處理方法
方法一：
● 提取緩沖液：0.9% 生理鹽水
● 步驟：麻醉小鼠，取腦組織。按每 200 mg 加 1 ml 的量加 0.9% 生理鹽水，機械研磨，勻漿在 4℃下以 12000 rpm 離心 10 min。取上清用于 ELISA 法檢測 IL-1β, IL-6, 及 TNF-α 的含量。
● 參考文獻：Lai, N., D. Wu, T. Liang, P. Pan, G. Yuan, X. Li, H. Li, H. Shen, Z. Wang and G. Chen (2020). "Systemic exosomal miR-193b-3p delivery attenuates neuroinflammation in early brain injury after subarachnoid hemorrhage in mice." J Neuroinflammation 17(1): 74.
方法二：
● 提取緩沖液：100 mM PIPES (pH?7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF 和蛋白酶抑制劑混合物（Sigma-Aldrich）
● 步驟：取海馬組織，在異 - 戊 - 烷中冷凍。將整個(gè)海馬體于 2–3ml 提取溶解緩沖液中勻漿，然后在 4℃下 16000g 離心 30 分鐘。上清用于 ELISA 法測定 BDNF 蛋白水平。單位 pg /mg 總蛋白。
● 參考文獻：Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). "Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion." EBioMedicine 47: 384-401.
方法三：
● 提取緩沖液：PBS 含有蛋白酶抑制劑混合物
● 步驟：處死動(dòng)物并取頭部。解剖獲取腦區（海馬體和皮質(zhì)）。并用 2- 甲基丁 - 烷在干冰上快速冷凍。將大腦樣本置于含有蛋白酶抑制劑混合物的無(wú)菌 PBS 中，均質(zhì)。4°C，11000 rpm，離心 20 分鐘。取上清備用。
● 參考文獻：Lee, J., S.L. Chan, and M P. Mattson (2002) Adverse effect of a presenilin-1 mutation in microglia results in enhanced nitric oxide and inflammatory cytokine responses to immune challenge in the brain. Neuromolecular Medicine 2(1):29-45.
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