藥效學(xué)實(shí)驗中心

輔助降糖功能評價(jià)動(dòng)物實(shí)驗方法

1 實(shí)驗項目
1.1 正常動(dòng)物降糖實(shí)驗
選擇健康成年動(dòng)物，按空腹3-5小時(shí)血糖水平分組，隨機選擇1個(gè)對照組和1個(gè)劑量組。對照組給予溶劑，劑量組給予高劑量濃度測試樣品連續30天測量空腹血糖值（空腹與實(shí)驗前相同），比較兩組動(dòng)物。
1.2 高血糖模型降血糖實(shí)驗
1.2.1 胰島損傷高血糖模型
1.2.1.1 原理：四氧嘧啶（或鏈脲佐菌素）是一種細胞毒劑，可選擇性地損傷一個(gè)物種的多個(gè)胰島細胞，導致胰島素分泌低，引起實(shí)驗性糖尿病。
1.2.1.2 建模方法
購買(mǎi)成年動(dòng)物，適應1天后，隨機選擇15只動(dòng)物禁食3-5小時(shí)，測定空腹血糖作為該批動(dòng)物的基礎血糖值。然后將動(dòng)物禁食24小時(shí)（自由飲水）并注射四氧嘧啶（使用前新鮮制備）建立模型，小鼠45-50 mg/kg BW.iv，50-80 mg/kg BW.iv老鼠。 5-7天后，動(dòng)物禁食3-5小時(shí)，測量血糖。血糖水平為10-25 mmol/L，是成功的高血糖動(dòng)物模型。選取高血糖模型動(dòng)物，按空腹3～5小時(shí)血糖水平分組，隨機選取1個(gè)模型對照組和3個(gè)劑量組（組間差異不大于1.1 mmol/L）。劑量組給予不同濃度的試驗樣品，模型對照組給予溶劑連續30天測量空腹血糖值（空腹與實(shí)驗前相同），比較血糖值，百分比各組血糖下降，并進(jìn)行糖耐量試驗。
1.2.2 地塞米松誘導的胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型
1.2.2.1 原理：糖皮質(zhì)激素可拮抗胰島素的生物學(xué)作用，抑制靶組織對葡萄糖的攝取和利用，促進(jìn)蛋白質(zhì)和脂肪的分解和糖異生，糖異生導致糖脂代謝紊亂，胰島素抵抗，誘導實(shí)驗糖尿病。
1.2.2.2 試驗方法：購買(mǎi)健康雄性大鼠（15020g)，正常維持日糧適應喂食3-5天，禁食3-4小時(shí)，采尾血測空腹前(0小時(shí))、2.5g/kg BW后血糖水平葡萄糖，測量0.5和2小時(shí)的血糖值，作為該批動(dòng)物的基準值。根據0、0.5小時(shí)血糖水平分為5組，即1個(gè)空白對照組、1個(gè)模型對照組和3個(gè)劑量組，每組15只大鼠?？瞻讓φ战M不做任何處理，三個(gè)劑量組灌胃不同濃度的試驗樣品，模型對照組連續35天給予相同體積的溶劑。每組喂食維持飼料。 1周后，模型對照組和3劑組換成高熱量飼料。喂養2周后，模型對照組和3劑組在高熱量飼料的基礎上給予地塞米松0.8mg。 /kgBW腹腔注射，每天一次，連用10-12天。試驗結束時(shí)，各組動(dòng)物禁食3-4小時(shí)，檢測空腹血糖、糖耐量、血清胰島素、膽固醇和甘油三酯水平。
1.2.3 四氧嘧啶誘導的胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型
1.2.3.1 原理：在高熱量飼料的基礎上，輔以低劑量四氧嘧啶，會(huì )引起糖/脂代謝紊亂，胰島素抵抗，誘發(fā)實(shí)驗性糖尿病。
1.2.3.2 造模方法：購入健康雄性大鼠（15020g），適應普通維持物喂養3-5天，禁食3-4小時(shí)，取尾血，葡萄糖給藥前（即0小時(shí)）測量。以2.5g/kg BW葡萄糖給藥后0.5和2小時(shí)的血糖值作為本批動(dòng)物的基礎值。根據0、0.5小時(shí)血糖水平分為5組，即1個(gè)空白對照組、1個(gè)模型對照組和3個(gè)劑量組，每組15只大鼠?？瞻讓φ战M不做任何處理，三個(gè)劑量組灌胃給予不同濃度的供試品，模型對照組連續給予等體積溶劑33天。每組喂食維持飼料。 1周后，模型對照組和3個(gè)劑量組換成高熱量飼料。喂食3周后，模型對照組及3劑禁食24小時(shí)（禁水），給予四氧嘧啶103 -105mg/kg BW腹腔注射，注射量1ml/100g 體重。注射后3-5天繼續喂高熱量飼料。實(shí)驗結束時(shí)，各組動(dòng)物禁食3-4小時(shí)，檢測空腹血糖、糖耐量、血清胰島素、膽固醇和甘油三酯水平。
2 實(shí)驗原理
2.1 動(dòng)物實(shí)驗和人體食品試驗所列指標均為強制性項目。
2.2 根據被測樣品作用原理的不同，可選擇方案1和方案2的動(dòng)物模型中的一種進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗。
2.3 高血糖模型動(dòng)物除檢測所列指標外，還應觀(guān)察供試品對正常動(dòng)物空腹血糖的影響。
3 結果的確定
3.1 動(dòng)物實(shí)驗：
方案一：若空腹血糖和糖耐量?jì)身椫笜酥粸殛?yáng)性，且對正常動(dòng)物的空腹血糖無(wú)影響，則可判定供試品有助于降低血糖功能性動(dòng)物的結果實(shí)驗是積極的。
方案二：若空腹血糖和糖耐量?jì)身椫笜酥粸殛?yáng)性，血脂（總膽固醇、甘油三酯）無(wú)明顯升高，對正常動(dòng)物空腹血糖無(wú)影響，則供試品可確定輔助降糖功能的動(dòng)物實(shí)驗結果為陽(yáng)性。