藥效學(xué)實(shí)驗中心

改善骨密度功能的動(dòng)物試驗評價(jià)方法

1 測試項目：

動(dòng)物試驗：分為方案一（供試物以鈣為主）和方案二（其他與骨代謝有關(guān)的功能成分，如內分泌調節）不含鈣或不依賴(lài)鈣的供試物有兩種方案2僅適用于每日鈣攝入量小于100mg的供試品，方案1適用于其他供試品。

1.1 方案一：對幼鼠生產(chǎn)發(fā)育的影響

斷奶大鼠約4周齡，體重約60-75g，同性別，每組8-12只。適應3-5天后，動(dòng)物禁食16小時(shí)，稱(chēng)重，按體重隨機分組，分籠飼養。給動(dòng)物喂食基礎低鈣飲食并自由飲水（去離子水以避免飲用水中的鈣）。飼養期為4周。 ，每周測量一次體重和體長(cháng)，記錄一周的食物攝入量，計算食物利用率；實(shí)驗結束時(shí)，取雙側股骨，在105℃烘箱中烘烤至恒重，稱(chēng)取骨干重。右側測量骨鈣，左側測量骨礦物質(zhì)密度，取股骨或肱骨進(jìn)行骨病理學(xué)檢查。

1.2 方案二：對去勢性骨質(zhì)疏松模型大鼠的影響

實(shí)驗動(dòng)物為Wistar或SD雌性大鼠，約300g，實(shí)驗前適應1周。麻醉下進(jìn)行去勢，切除雙側卵巢；選擇另一部分大鼠進(jìn)行類(lèi)似手術(shù)，不切除雙側卵巢，僅切除部分脂肪。術(shù)后將大鼠適應性飼養3-5天，然后分組。實(shí)驗動(dòng)物按體重隨機分組，每組至少10只。測試樣品每天給藥一次。動(dòng)物可以自由獲取水和基礎飼料。喂養期為12周。實(shí)驗結束時(shí)，取大鼠雙側股骨進(jìn)行測量。測定股骨干重、骨鈣含量、骨礦物質(zhì)密度和骨組織病理學(xué)。

1.3 鈣吸收代謝實(shí)驗：

4周齡左右斷奶的SD大鼠，體重約60-80克，同性別，每組至少6只。適應3-5天后，將大鼠分別在單獨的籠子中飼養4周。每周測量一次長(cháng)度和重量。用低鈣對照組的基礎低鈣飼料（150mg/100g飼料）配制各劑量的受試物組和碳酸鈣對照組。動(dòng)物隨意喂食，每周稱(chēng)量動(dòng)物食物消耗量以計算食物利用率。動(dòng)物隨意飲用去離子水。實(shí)驗進(jìn)行到第四周的前三天，進(jìn)行鈣代謝實(shí)驗，記錄3天的攝食量（g/3d），收集3天的糞便，測定鈣含量在飼料和糞便中測定。測定方法采用原子吸收分光光度法測定。

鈣攝入量（mg/d）=飼料中鈣含量（mg/g）×飼料消耗量（g/d）

糞便鈣（mg/d）=糞便中鈣含量（mg/d）g）×糞便排泄量（g/d）

鈣表觀(guān)吸收率=（鈣攝入量-糞鈣）/鈣攝入量*100%。

2 實(shí)驗原理：

2.1 根據被測樣品作用原理的不同，可選擇方案一和方案二中的一種進(jìn)行動(dòng)物試驗。

2.2所列指標均為必填項。

2.3 如果樣品中含有未經(jīng)批準用于食品的含鈣化合物，必須進(jìn)行鈣吸收和代謝試驗；該樣本使用了營(yíng)養強化劑范圍內的鈣源和來(lái)自普通食物（如食用動(dòng)物的骨頭）的鈣源。 、牛奶等），可能無(wú)法進(jìn)行鈣吸收和代謝測試。

3 結果判斷

3.1 方案一：

a) 至少一項生長(cháng)發(fā)育指標（體重、身長(cháng)、股骨干重）明顯高于低鈣對照組；

b) 股骨骨鈣含量或骨密度顯著(zhù)高于低鈣對照組，無(wú)論是病理（骨組織學(xué)還是鈣沉積）均優(yōu)于低鈣對照組；

如果滿(mǎn)足以上要求，則可以確定受試物具有“有助于增加骨密度的功能”的作用。

3.2 方案二：

受試物試驗組股骨骨鈣含量或骨密度明顯高于模型對照組，骨組織形態(tài)學(xué)指標較去勢模型對照組有明顯改善。只有這樣才能確定受試物質(zhì)具有“有助于增加骨密度的功能”的作用。