藥效學(xué)實(shí)驗中心

緩解體力疲勞的功能評價(jià)方法

1 測試項目

1.1 負重游泳測試

SPF級NIH小鼠，雌性，50只，隔離3天，隨機分為陰性對照組、陽(yáng)性藥物對照組、低、中、高劑量組供試品，10只/組。對照組給予蒸餾水，陽(yáng)性組給予陽(yáng)性藥物，各藥物組給予相應劑量藥物，連續給藥30天。最后一次給予供試品30分鐘后，將小鼠尾根部裝有5%體重鉛皮的小鼠放入游泳箱中游泳。水深不小于30cm，水溫25±1℃。記錄小鼠開(kāi)始游泳至死亡的時(shí)間，即小鼠的負重游泳時(shí)間。

1.2 血清尿素氮實(shí)驗

SPF級NIH小鼠，雌性，50只，隔離3天，隨機分為陰性對照組、陽(yáng)性藥物對照組、低、中、高試驗樣品劑量組，10只/組。對照組給予蒸餾水，陽(yáng)性組給予陽(yáng)性藥物，每組給予相應劑量藥物，連續給藥30天。最后一次供試品給藥后30分鐘，在30℃的水中自由游泳90分鐘，休息60分鐘，然后采血。置于4℃冰箱約3小時(shí)，凝血后2000prn/min離心15分鐘，取血清，用全自動(dòng)生化分析儀測定血尿素氮和磷酸肌酸激酶（CK）水平。

1.3 肝糖原實(shí)驗：

SPF級NIH小鼠，雌性，50只，隔離3天，隨機分為陰性對照組、陽(yáng)性藥物對照組、低、中、高試驗樣品劑量組，10只/組。對照組給予蒸餾水，陽(yáng)性組給予陽(yáng)性藥物，每組給予相應劑量藥物，連續給藥30天。最后一次供試品給藥后30分鐘處死動(dòng)物，用生理鹽水沖洗肝臟并用濾紙吸干，準確稱(chēng)取肝臟100mg，按照肝糖原含量測定糖原試劑的要求。

1.4 血乳酸實(shí)驗

SPF級SD大鼠，雄性，50只，隔離3天，隨機分為陰性對照組、陽(yáng)性藥物對照組、低、中、高劑量組供試品，10只/組。對照組給予蒸餾水，性別組給予陽(yáng)性藥物，每組給予相應劑量的藥物，連續給藥30天。

(1)最后一次檢測后30分鐘采血，然后在30℃的水中自由游泳10分鐘，然后停止，再采血。休息20分鐘后，采血。用乳酸計測定小鼠游泳前、游泳10 min后和休息20 min后的血乳酸值。

血乳酸曲線(xiàn)下面積=1/2（游泳前血乳酸值+游泳后0分鐘血乳酸值）×10+1/2（游泳后0分鐘血乳酸值+游泳時(shí)血乳酸值）游泳后20分鐘值）×20

(2)取肝臟冷凍保存，檢測肝臟中MDA、SOD和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的含量。

二、實(shí)驗原理

2.1 動(dòng)物實(shí)驗所列指標為強制性項目。

2.2 同一批試驗樣品在實(shí)驗前必須進(jìn)行違禁藥品檢測。

2.3 運動(dòng)實(shí)驗與生化實(shí)驗指標檢測相結合。

3.結果判斷

如果負重游泳試驗結果為陽(yáng)性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原/肌糖原三項生化指標中任意兩項為陽(yáng)性，則可判定該試驗樣品具有緩解體力疲勞的功能。