藥效學(xué)實(shí)驗中心

增強免疫力功能動(dòng)物實(shí)驗評價(jià)方法

1.實(shí)驗原理

免疫系統主要包括中央和外周淋巴器官、淋巴組織和遍布全身的淋巴細胞、抗原提呈細胞等，還包括血液中的白細胞。胸腺是一個(gè)中央淋巴器官，其主要功能是保證T淋巴細胞的產(chǎn)生和成熟。外周淋巴器官包括血液、淋巴管和免疫活性細胞;脾臟對抗原有免疫反應。脾竇內的巨噬細胞具有清除功能。脾的白髓含有記憶B細胞，并對t依賴(lài)抗原產(chǎn)生體液免疫反應。

淋巴細胞是特異性免疫反應的主要細胞群。根據其表面標記，淋巴細胞可分為T細胞、B細胞和自然殺傷細胞(NK)。T細胞又可分為CD4+ (Th)細胞和CD8+T淋巴細胞。B淋巴細胞轉化為漿細胞后可合成并釋放抗原特異性抗體。免疫系統可產(chǎn)生特異性和非特異性免疫功能。

檢測免疫系統各種代表性指標的變化，可以確定增強免疫作用的功能。

2. 試驗項目

2.1動(dòng)物選擇

建議使用近交系小鼠，如C57BL/6J、BALB/ C等，6-8周齡，18-22g (BALB/ C物種16-18g)，單性別，雌雄各10-15只。

2.2動(dòng)物實(shí)驗

2.2.1重量

2.2.2器官/體重比測定:胸腺/體重比、脾臟/體重比

2.2.3細胞免疫功能測定:cona誘導小鼠脾淋巴細胞轉化試驗、二硝基氟苯誘導遲發(fā)性過(guò)敏試驗(DTH)

2.2.4體液免疫功能的測定:抗體產(chǎn)生細胞和血清溶血素

2.2.5單核和巨噬細胞功能測定:小鼠碳廓清實(shí)驗、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實(shí)驗

2.2.6 NK細胞活性測定

3.結果測定

3.1采用正常動(dòng)物實(shí)驗，檢測樣品具有增強免疫力的作用。在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核巨噬細胞功能和NK細胞活性四個(gè)方面，如果其中任何兩個(gè)方面的檢測結果均為陽(yáng)性，則可判斷該檢測樣品具有增強免疫的作用。其中，兩個(gè)實(shí)驗測量細胞免疫功能的結果均為陽(yáng)性，說(shuō)明細胞免疫功能檢測結果為陽(yáng)性。兩組實(shí)驗的體液免疫功能試驗結果均為陽(yáng)性，說(shuō)明體液免疫功能試驗陽(yáng)性。單核巨噬細胞功能測試項目中兩個(gè)實(shí)驗結果均為陽(yáng)性，單核巨噬細胞功能測試結果均為陽(yáng)性。如果超過(guò)一個(gè)劑量的NK細胞活性試驗結果為陽(yáng)性，則確定NK細胞活性結果為陽(yáng)性。正常動(dòng)物實(shí)驗需要四方面的測定。

3.2采用免疫缺陷動(dòng)物實(shí)驗，樣品可增強免疫缺陷者的免疫功能。在建立免疫缺陷模型的條件下，血液白細胞計數、細胞免疫功能、體液免疫功能、單核巨噬細胞功能和NK細胞活性5個(gè)方面的任何2個(gè)檢測結果均為陽(yáng)性，確定該檢測樣品對免疫缺陷人群具有增強免疫力的作用。細胞免疫功能試驗項目中兩個(gè)實(shí)驗結果均為陽(yáng)性，或任意兩個(gè)劑量組實(shí)驗結果均為陽(yáng)性，可確定細胞免疫功能試驗結果為陽(yáng)性。兩組實(shí)驗均陽(yáng)性即為體液免疫功能試驗結果陽(yáng)性，或任意兩劑量組實(shí)驗均陽(yáng)性即為體液免疫功能試驗結果陽(yáng)性。若單核巨噬細胞功能測定項目中兩個(gè)實(shí)驗結果均為陽(yáng)性，或任一實(shí)驗中兩個(gè)劑量組的結果均為陽(yáng)性，則可判斷單核巨噬細胞功能試驗結果為陽(yáng)性。如果超過(guò)一個(gè)劑量的NK細胞活性試驗結果是陽(yáng)性的，可以確定陽(yáng)性的NK細胞活性結果。如果兩種或兩種以上劑量的血白細胞總數結果均為陽(yáng)性，則可確定血白細胞總數結果為陽(yáng)性。

在免疫缺陷模型的動(dòng)物實(shí)驗中，至少需要進(jìn)行三次測量。

在所有的試驗中，沒(méi)有任何一項試驗使免疫抑制劑的效果惡化。